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钟表机械网 2022-10-04 01:49:52
使用马尔文子公司Viscotek的SEC/GPC表征多肽的水动力变化
根据巴黎巴斯德研究所科学家们的研究,当尺寸排阻色谱与三重检测器(SEC-TDA)联用后,能够分辨蛋白质的寡聚、水合与粒形变化。这一工作是通过使用马尔文的子公司--viscotek公司的高级凝胶色谱系统实现的。
通过整合Vis年开机3000天以上cotek的三重检测阵列系统(TDA302)与GPCmax色谱系统,研究团队表征了百日咳致病菌的主要毒性物质——腺苷酸环化酶毒素碎片的结构与水动力学特征。研究团队显示钙结合导致了蛋白质中重要的水动力学变化,为更深入地了解其生物功能打下基础。研究成果已发表在著名杂志Biological Chemistry上(2009年1月刊,现在页)。
尺寸排阻色谱(SEC)的传统校准方式是基于拥有已知标准蛋白质的水动力学体积。此类校准过程会由于目标蛋白质与SEC介质之间可能存在的相互作用产生误差。因此,传统校准无法提供分子质量或可靠的水动力学信息。
Viscotek TDA302使用一系列检测器对流出样进行。检测器包括一个紫外-可见分光光度计,一个差分粘度仪(RI),一个小角(7°)光散射检测器,一个侧向光散射(90°)检测器,以及一个压差韦斯特桥粘度计。OmniSEC操作软件能够分析所有收集到的数据,并能以恰当的方式显示。通常,紫外检测器与差分粘度计可用于如有需求测定蛋白质浓度,以获取绝对分子质量(MM)与特性粘弹簧螺母度(IV)信息。选用用了Viscotek T2、TestStar安装成功以后D302系统,绝对分子量(MM)便可直接从光散射数据获得,而特性粘度亦可直接从粘度计获取,从而提供蛋白质的含水量与形状信息。在本应用中,特性粘度是唯一受钙结合影响的童车配件水动力学参数。这一系统提供的信息是了解蛋白质结合与折叠行为的基本信息,也是了解蛋白质是如何影响人体的关键。
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